지연 검량을 실행하려면 검량된 시스템에 포함할 모든 모듈을 식별하고 다음 정보를 포함하는 분석법을 생성해야 합니다:
시료 정보(위치, 이름 등)
각 모듈에 대한 설정 정보 및 실행(샘플러, 펌프, 검출기 등)
지연 검량 절차는 잠재적인 문제를 피하기 위해 가능한 한 대상 응용 분야에 가까운 분석법 설정으로 수행해야 합니다. 예기치 않은 문제를 방지하려면 대상 응용 프로그램과 동일한 유량 조절기 설정(분할 모드)을 사용하는 것이 좋습니다. 분할 흐름의 감지기에서 신호가 너무 작은 경우 분할 모드를 모드 1에 가까운 값으로 조정해야 합니다.
중요: 분할 흐름의 감지기에 대해 측정된 지연 시간 및 볼륨은 주 흐름과 보충 흐름의 조합에 대해서만 유효합니다. 주 흐름의 감지기에 대해 검량된 지연 시간 및 부피만 실제 유량에 따라 다시 계산됩니다.
지연 및 체크아웃 교정기를 사용한 교정은 등각적으로 수행할 수 없습니다. 높은 비율의 유기 용매를 사용할 경우 혼합물의 일부 염료가 컬럼에서 제대로 용출되지 않습니다. 이는 표면적이 높은 컬럼으로 분리되는 설폰화 염료의 특정 효과이며, 이는 분취 크로마토그래피에 일반적입니다.
첫 번째 실행 전에 95% 유기 채널 B를 사용하여 컬럼 용량을 세 번 플러싱합니다(약 2분).
아래 테이블에는 다양한 컬럼 직경에 대한 Agilent 지연 및 체크아웃 교정기(부품 번호 5190-8223)의 권장 기본 주입량이 나와 있습니다. 필요한 경우 검출기 또는 분획 수집기 지연 센서의 최종 응답이 포화되거나 너무 낮은 경우 주입량을 조정하십시오.
컬럼 내경 | 표준물질 주입량 |
|---|---|
3.0mm | 0.5 μL |
4.6mm | 1 μL |
약 10 mm | 10 μL |
약 20 mm | 50 μL |
30mm | 100 μL |
50mm | 300 μL |
시스템에 1290 Infinity II 전처리 오픈 베드 샘플러/수집기(G7158B)가 포함된 경우 샘플러 분석법에서 작동 모드를 전처리로 전환합니다. 분석법 사전 설정 목록에서 비극성 시료 매트릭스에 대한 사전 설정을 선택합니다. 오른쪽의 플러그 설정에서 시료 후 플러그 용매로 사용할 25% 메탄올이 들어 있는 물병의 위치를 입력합니다. 다른 모든 파라미터는 기본 설정으로 둡니다.
LC 시스템은 특정 유량 범위에 맞게 설계된 하나 이상의 캐필러리 키트와 함께 제공됩니다. 설치된 모세관에 따라 다음과 같은 컬럼 및 유량 조합을 권장합니다.
컬럼 내경 | 유량 범위 | 시스템과 함께 제공되는 컬럼 |
|---|---|---|
3.0mm | 0.4-0.6 mL/min | 3.0 × 50 mm, 2.7 μm(699975-302) |
4.6mm | 1.0-1.5 mL/min | 4.6 × 100mm, 2.7μm(695975-902) |
약 10 mm | 4-8 mL/min | 10 × 50mm, 5μm(446905-802) |
약 20 mm | 15-40 mL/min | 21.2 × 50mm, 5μm(446905-702) |
30mm | 40-80 mL/min | 30 × 50mm, 5μm(446905-302) |
50mm | 80-200 mL/min | 50 × 50mm, 5μm(446905-502) |
배관 키드의 패시브 분할이 네뷸레이저 전 주입에 포함된 경우 제안된 보충 흐름은 1.5mL/min입니다.
배관 키드의 패시브 분할이 사용되지 않는 경우 제안된 보충 흐름은 0.5mL/min이어야 합니다. ESI 소스의 최대 유속은 0.8mL/min입니다.
다음 그레디언트는 시약 규모 시스템 캐필러리 키트에 포함된 50mm 길이 컬럼과 함께 사용할 것을 권장합니다. 검량을 위해 더 긴 컬럼을 사용하는 경우 그레디언트 시간을 적절한 계수만큼 연장하십시오. 유속을 적절히 조정하면 그레디언트는 컬럼의 모든 내경에 적합합니다.
시간 | 조성 A | 조성 B |
|---|---|---|
프리컨디셔닝 시간: 1.5 min | ||
0 min | 90% | 10% |
0.5 min | 90% | 10% |
4.0 min | 5% | 95% |
6.0 min | 5% | 95% |
6.1 min | 90% | 10% |
정지 시간: 7.0 min | ||
크로마토그램에 스파이크 또는 스파이크가 피크와 같은 밴드로 결합된 경우, 시작 조성을 10%에서 20%로 늘려 보십시오.
UV | 600nm 파장(기준 파장 없음)을 사용하여 지연 및 체크 아웃 교정 염료의 파란색 교정 염료를 모니터링합니다. |
MS | 파란색 검량 염료에 가시적인 이온:
|
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