Criar uma sequência para coleta de fração baseada em massa (MBFC)

Para criar uma sequência para MBFC, primeiro configure seus instrumentos e o método de aquisição no OpenLab CDS.

Configurar instrumentos

Seu instrumento deve conter um módulo coletor de frações (FC) e um módulo detector de massa (MSD).

• MSD: Marque a opção Coleta de frações habilitada para acessar a seção Parâmetros de coleta de frações baseada em massa no método de aquisição.

  

• FC: O MSD deve estar listado na seção Detectores de Pico (detectado automaticamente).

  

Configurar método de aquisição

Configure as duas partes do método para dar suporte à MBFC:

• Detector de massa (MSD)

• Coletor de frações

Configurar o detector de massa (MSD)

1. Selecione a seção Aquisição avançada.

   Caso tenha selecionado a opção Coleta de frações habilitada ao configurar o instrumento, a seção Parâmetros de coleta de frações baseada em massa será exibida.

2. Defina os compostos a serem considerados para acionar a coleta de fração.

   

3. Clique em para adicionar um ou mais compostos-alvo.

   

4. Defina o Nome do composto e a Massa monoisotópica ou a Fórmula do composto.
   Caso defina uma fórmula, o OpenLab CDS calculará a massa monoisotópica automaticamente.

5. Selecione Íons adutos e o Estado de carga.
   Os íons interagirão com a molécula neutra na fonte de ionização para criar o íon que será rastreado pelo detector de massa para acionar uma fração.
   É possível selecionar um ou vários adutos por composto.
   O OpenLab CDS define Positivo ou Negativo automaticamente na coluna Polaridade de acordo com o aduto selecionado.

A coluna Gatilho de pico de coleta de frações apresenta cinco opções (A, B, C, D, NOT). Essas opções correspondem aos sinais do coletor de frações configurados na parte do coletor de frações do método.

Não é possível editar a coluna m/z. Corresponde à massa/carga que o MSD detecta. O valor é calculado com m = [massa monoisotópica + massa do aduto] e z = carga do íon gerado.

Na tabela Parâmetros de coleta de frações baseada em massa, você define:

• os valores dos parâmetros do MSD usados pelo detector de massas para ionizar e detectar os íons (tensão do fragmentador, fator de ganho do detector, tempo de permanência (dwell)),

• a coluna Massa-alvo da fração entre três valores A1, A2 e A3.
  Esses três valores correspondem a três colunas de sequência exibidas para um instrumento de MBFC: SQ: Massa-alvo da fração do T1 – 1 até SQ: Massa-alvo da fração do T3 – 3. Você tem a opção de definir as massas-alvo (massas monoisotópicas) a serem usadas em vez das definidas no método durante a aquisição da amostra. Isso permite substituir as massas-alvo do método mantendo os parâmetros de ionização, adutos e cargas e os parâmetros do MSD definidos no método pelo valor especificado na coluna Massa-alvo da fração correspondente da sequência.

Configurar o coletor de frações

A interface do Coletor de frações suporta coleta de frações baseada em UV e massa.

Para configurar o coletor de frações:

1. Selecione Habilitado para ativar a coleta de frações (comum para UV e MS).

2. Selecione a guia MS da tabela.

3. Preencha os campos correspondentes na tabela.

   • Utilizar: Marque todos os sinais esperados.

   • Detector de Picos: Selecione o módulo MSD.

   • Sinal Utilizado: Selecione os sinais configurados na tabela Parâmetros de coleta de frações baseada em massa para o detector de massas (A, B, C, D, SEM em Utilizar Sinal)

   • Modo de Detecção de Pico: Selecione o parâmetro de integração usado para detectar um pico e atribua um valor no campo correspondente (ex.: threshold). É possível definir graficamente o valor da seção Visualização de frações usando um cromatograma já adquirido como modelo.

Na seção Combinações de gatilhos, são definidas as condições dos picos detectados pelos detectores de MS e UV.

Na seção Avançado, é possível configurar os atrasos (tempo ou volume) a serem aplicados ao coletar uma fração. No caso da MBFC, não é possível usar o volume de atraso, apenas o tempo de atraso. Selecione Usar tempo e defina um tempo em segundos ou Conforme calibrado (Tempo)

• A opção Conforme calibrado (Tempo) usa o tempo de atraso calculado pela ferramenta de calibração de atraso que é armazenado no firmware do coletor de frações

• A opção Conforme calibrado (Tempo) pode ser usada somente se a calibração de atraso tiver sido realizada com um método de aquisição semelhante ao atual (mesmo fluxo da bomba principal, fluxo da bomba makeup, taxa de split, bobina de atraso).

As outras opções (Usar Volume, Conforme calibrado) são exclusivas para UV e não podem ser usadas para MBFC.