Configurar a pureza de amostra LC/MS
Pré-requisitos
Para que seja possível realizar o procedimento conforme descrito, você precisa dos seguintes privilégios: Os privilégios são configurados no Control Panel.
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Dados > Editar informação da amostra
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Método de Processamento > Editar parâmetros de pureza da amostra
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Método de Processamento > Editar parâmetros de extração de cromatograma
Método de Processamento > Editar parâmetros de sinal
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Método de Processamento > Editar parâmetros de identificação
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Se o projeto aplicar a aprovação do método, o status do método deverá ser Genérico. Para obter detalhes, consulte Aprovação do método.
A janela Resultados da Pureza de Amostra fica visível apenas nos layouts Cromatogramas e Resultados. |
Para calcular a pureza da amostra MS
Carregar os dados relevantes.
Na janela Lista de Injeção, verifique os alvos para o cálculo da pureza. Os alvos podem já estar definidos na Aquisição. Se necessário, ajuste os alvos nas colunas Alvo 1 – Alvo 5.
Se a injeção não tiver nenhum método de processamento associado a ela, abra ou crie um método de Pureza da amostra LC/MS e associe-o à injeção.
Somente métodos com a configuração de método Pureza da amostra LC/MS contêm a seção Pureza da amostra MS.
Para alinhar diferentes sinais * * Se você utilizar diferentes detectores conectados em série (por exemplo, detectores UV e MS), cada detector visualiza o(s) analito(s) em um momento ligeiramente diferente.Para reduzir o tempo de atraso, minimize o volume de conexão entre os detectores.Para o tempo de atraso restante, alinhe os sinais no software: Selecione um pico integrado que ocorra em todos os sinais sendo utilizados; no nó Geral > Sinais do método de processamento, selecione os sinais relevantes e introduza o tempo de retenção para o pico em cada sinal. Clique em Calcular atraso a partir do RT.
Para assegurar que os cromatogramas de íons são extraídos durante toda a corrida: No nó Extração > Cromatograma do método, introduza 0.00 como valor para a janela RT absoluto e a janela RT relativo.
No nó Extração > Espectro do método, configure como você deseja considerar a subtração do fundo.
No nó Pureza da Amostra MS > Propriedades do método, marque a caixa de seleção Calcular pureza da amostra.
Informe o Limite mínimo de pureza.
Selecione um Sinal. Se você escolher um sinal MS, selecione o cálculo que você deseja usar.
Nas guias Íons Positivos e Íons Negativos, selecione os adutos que podem ser anexados à sua molécula-alvo e causar um aumento no m/z observado.
Volte a processar os dados.
No layout Cromatogramas, abra as janelas Espectro MS e Resultados de Pureza da Amostra.
Se você preparar um método para processamento automatizado após a aquisição, é possível carregar um arquivo de dados inicial que tenha sido adquirido sem um método de processamento.
Você pode informar uma massa molecular (por exemplo, 310) ou uma fórmula (por exemplo, C12 H14 N4 O4 S).
O atraso será aplicado na próxima vez que você reprocessar. Os cromatogramas (por exemplo, MS e UV) serão alinhados.
Marque a caixa de seleção Extrair espectros de picos integrados no reprocessamento.
Após o reprocessamento, um código de cores na janela Resultados da Pureza de Pico indicará se todos os alvos foram encontrados e se a amostra global é pura. Valores de pureza inferiores ao Limite mínimo de pureza são coloridos em vermelho.
Se adquirir dados positivos e negativos, escolher um sinal detector não MS irá normalmente gerar resultados melhores.
Dependendo da sua escolha, a fórmula correspondente é usada para calcular a pureza. Para detalhes sobre o cálculo, consulte Cálculo de pureza da amostra MS.
Se necessário, informe novos transmissores de carga ou perdas neutras e clique em + para adicioná-los à lista. Ajuste os estados carregados mín. e máx. do seu íon alvo e selecione os agregados que seu íon pode acumular.
A aplicação extrai EICs com base nos alvos, adutos, dímeros/trímeros e estados carregados. Todos os EICs são mostrados na janela Cromatogramas e listados na árvore de injeção.
Por exemplo, se 310 for um alvo e +H e +Na forem adutos, os EICs serão extraídos para 311 [M+H] e 333 [M+Na].
Na janela Espectro MS, um espectro MS é mostrado para cada pico integrado.
Na janela Resultados de Pureza da Amostra, um código de cores indicará se todos os alvos foram encontrados e se a pureza da amostra global é superior ao limite especificado.
Para mostrar apenas resultados puros ou apenas resultados impuros, clique no respectivo botão na parte superior da tabela.
O lado direito da janela mostra os valores detalhados para todos os alvos na injeção selecionada. Assim que um alvo não for encontrado ou tiver um valor de pureza inferior ao limite especificado, as colunas Alvos médios encontrados e Pureza média para uma injeção serão coloridas em vermelho.
