准备采集方法

Oligo Analysis Accelerator 是为分析使用 Agilent 单四极杆 LC/MSD 检测器获取的数据而开发的。这确保了 LC/MS 可以在全扫描、轮廓图模式下运行，并具有可接受的灵敏度，可对定量限大于或等于 0.2 %（按峰面积计算）的低水平杂质进行定量。

准备

• 您需要项目管理 > 编辑项目内容和采集方法 > 创建和修改采集方法权限。权限在控制面板中配置。

1. 启动仪器。

2. 准备两种采集方法，一种采用标准条件，另一种采用苛刻条件。以下是建议的 LC 和 MSD 方法参数。

采集方法建议

LC 参数

HPLC	1260/1290 Infinity II 或 Infinity III
色谱柱	Agilent AdvanceBio 寡核苷酸，2.1 x 150 mm，2.7 µm
流动相	A：10 %ACN，5 mM 醋酸三丁铵，1 µm EDTA B：80 %ACN，5 mM 醋酸三丁铵，1 µm EDTA
流速	0.25 mL/min
色谱柱温度	50 °C
梯度	45-80 % B（22 分钟内）
UV	260 nm | 带宽 4 nm 参考值：400 nm | 带宽 80 nm

MSD 参数

MSD	G6135C 或 G6170A
数据存储	完整，轮廓图模式
离子源	ESI
干燥气流量	12.0 L/min（标准） 13.0 L/min（苛刻）
气体温度	260 °C（标准） 350 °C（苛刻）
雾化器压力	25 psig
毛细管电压	4000 V
模式	负
扫描	FLP，-350 至 +150 m/z 例如，对于 1728.1，1820-2320 m/z，轮廓图
扫描时间	1149 ms（标准） 975 ms（苛刻）
裂解电压	100 V
增益因子	2

尽管可以接受一些偏差，但以下几点是确保结果可靠和可重复的必要条件：

• 尽管许多 Oligo 方法使用 Agilent Jet Stream 离子源，但使用标准 ESI 可确保离子源内离子碎片保持在可接受的水平。

• 优化离子源内离子碎片，最大限度地减少碱性或脱嘌呤杂质。这包括离子源温度（标准 MS 条件下通常为 250-260 °C）和碎裂电压（100-150 V）。

• 建议使用生物惰性系统，如 Agilent 1290 Infinity II/III BioLC，以减少金属加合物。这对可能与其他已知杂质（如铁（Fe+）和 CNET（N3-(2-氰乙基)胸腺嘧啶）谱图重叠的加合物至关重要。

• 建议使用醋酸三丁铵作为离子配对试剂，以确保目标分子主要呈现四电荷态。

• 确保 UV 检测器不会引起光氧化。二极管阵列检测器可能会出现这种情况。