Oligo Analysis Accelerator는 Agilent 단일사중극자 LC/MSD 검출기를 사용하여 수집된 데이터의 분석을 위해 개발되었습니다. 이 기기를 통해 LC/MS를 허용 가능한 감도를 사용한 전체 스캔의 프로필 모드에서 실행하여 정량 한계가 피크 면적 기준 0.2 % 이상인 소량 불순물을 수량화할 수 있습니다.
준비
|
기기를 시작합니다.
두 가지 수집 방법(표준 조건에서 수집, 가혹 조건에서 수집)을 준비합니다. 아래는 권장된 LC 및 MSD 분석법 파라미터입니다.
HPLC | 1260/1290 Infinity II 또는 Infinity III |
컬럼 | Agilent AdvanceBio Oligonucleotide, 2.1 x 150mm, 2.7µm |
이동상 | A:10% ACN, 5mM 트리부틸암모늄 아세테이트, 1µm EDTA B: 80% ACN, 5mM 트리부틸암모늄 아세테이트, 1µm EDTA |
유량 | 0.25mL/min |
컬럼 온도 | 50°C |
그레디언트 | 22분 내 45-80% B |
UV | 260nm | 대역폭 4nm 참조: 400nm| 대역폭 80nm |
MSD | G6135C 또는 G6170A |
데이터 저장소 | 전체, 프로필 모드 |
소스 | ESI |
건성 가스 흐름 | 12.0L/min(표준) 13.0L/min(가혹) |
가스 온도 | 260°C(표준) 350°C(가혹) |
네뷸라이저 압력 | 25psig |
모세관 전압 | 4000V |
모드 | 네거티브 |
스캔 | FLP, -350 ~ +150m/z 예: 1728.1의 경우, 1820-2320m/z, 프로필 |
스캔 시간 | 1149ms(표준) 975ms(가혹) |
프래그멘터(Fragmentor) | 100V |
게인 계수 | 2 |
어느 정도 변화는 용인될 수 있지만, 확고하고 재현 가능한 결과를 얻기 위해서는 다음 사항이 필요합니다.
비록 많은 올리고 분석 방법에서 Agilent Jet Stream 소스를 사용하지만, 표준 ESI를 사용하면 소스 내 분해(in-source fragmentation) 현상을 허용 가능한 수준으로 억제할 수 있습니다.
소스 내 분해(in-source fragmentation)를 최적화하여 무염기 또는 정화되지 않은 불순물을 최소화합니다. 여기엔 소스 온도(일반적으로 표준 MS 조건의 경우 250-260°C) 및 fragmentor 전압(100-150V)을 포함합니다.
금속 첨가 생성물을 줄이기 위해 Agilent 1290 Infinity II/III BioLC와 같은 바이오 비활성 시스템을 사용하는 것이 좋습니다. 이것은 철(Fe+) 및 CNET(N3-(2-사이아놀에틸)티민)과 같은 다른 알려진 불순물과 스펙트럼이 겹칠 수 있는 첨가 생성물에 중요합니다.
트리부틸암모늄 아세테이트는 4전하량이 우세하도록 하므로, 이온 쌍 시약으로 권장됩니다.
UV 검출기가 광산화를 유발하지 않도록 합니다. 광산화는 다이오드 어레이 검출기에서 발생할 수 있습니다.
base-id: 11123986315
id: 18014409633468299