Quantificar compostos usando MS

Se você quiser quantificar suas amostras usando espectrometria de massas, deverá primeiro descobrir quais valores m/z pode usar para quantificar os diferentes compostos. O Data Analysis o ajuda a encontrar as massas e os tempos de retenção apropriados.

Preparações

• Para que seja possível realizar o procedimento conforme descrito, você precisa dos privilégios Gerenciamento de Projeto > Editar conteúdo do projeto, Método de Processamento > Editar parâmetros de identificação e Dados > Editar informações da amostra. Os privilégios são configurados no Control Panel.

• Se o projeto aplicar a aprovação do método, o status do método deverá ser Genérico. Para obter detalhes, consulte Aprovação do método.

1. Carregue os dados.

2. Certifique-se de que haja um método MS associado aos dados (configuração do método MS). Alternativamente, crie um novo método de processamento MS e associe-o aos seus dados:

   1. Na guia da faixa de opções Processamento, clique em Novo Método .
   2. Selecione a configuração do método MS e clique em Criar método.
   3. Salve o novo método de processamento: Na guia da faixa de opções Processamento, clique em Salvar Método Como .
   4. Em seguida, associe um novo método de processamento às suas injeções: Selecione as injeções relevantes e clique em Associar Método na guia da faixa de opções Processamento.

3. No método de processamento, ajuste os parâmetros de integração. Considere o uso de eventos específicos para os sinais de íons extraídos.

   1. No nó Eventos de Integração > Padrão do método de processamento, marque as caixas de seleção Utilizar eventos específicos do sinal para os sinais de TIC em SCAN, SIM ou EIC.
   2. Ajuste os parâmetros para os sinais relevantes.

   Por exemplo, defina Rejeição área como 200000 para TIC em SCAN e como 10000 para EIC.

4. Para extrair cromatogramas de íons em uma janela de tempo em torno de cada pico-alvo em vez de em todo o tempo de corrida: No nó Extração > Cromatograma do método de processamento, insira um valor para a Janela de tempo de retenção de extração de EIC para compostos-alvo.

   Geralmente, é melhor escolher um intervalo de tempo amplo o suficiente que se estenda além do pico em questão para atribuir corretamente os pontos da linha de base. Por exemplo, utilize uma Janela de RT absoluto de 0,1 min em torno de cada pico.

   Com valores zero, EICs são extraídos em todo o intervalo de tempo.

5. Configure a subtração de fundo para espectros MS.

   No nó Extração > Espectro do método de processamento, escolha um Modo do Background apropriado para espectros no ápice do pico.

6. No nó Compostos > Identificação do método de processamento, na guia Configuração do Qualificador, verifique as configurações dos íons qualificadores.

7. Para obter nomes do composto automaticamente, com base em uma pesquisa na biblioteca MS: No nó Análise Espectral > Pesquisa na Biblioteca MS do método, escolha uma biblioteca de MS na lista suspensa.

   NOTA

   Caso você deseje usar a Pesquisa na Biblioteca MS, deverá instalar previamente a Pesquisa de MS NIST e as bibliotecas MS necessárias. O software NIST pode ser adquirido com a Agilent.

   O status da caixa de seleção Procurar automaticamente por picos TIC não é relevante neste cenário.

8. Considere salvar o método.

9. Volte a processar a injeção.

   Todos os picos relevantes agora devem estar integrados.

10. Clique com o botão direito na injeção na árvore de injeção e, em seguida, selecione Adicionar/Atualizar compostos MS.

    OU: Opcionalmente, clique com o botão direito na tabela de composto ou no cromatograma e selecione Adicionar/atualizar compostos MS dos respectivos menus contextuais.

    O aplicativo analisa os dados automaticamente, conforme descrito aqui e adiciona as informações correspondentes ao método de processamento.

11. Nomeie os compostos, e verifique e complete a tabela de compostos no método.

12. No nó Compostos > Calibração do método, informe as concentrações corretas para seus níveis de calibração.

    Considere salvar o método.

13. Na janela Lista de Injeção, informe os tipos de amostra corretos e os níveis de calibração.

14. Opcional: Para adicionar compostos de outros dados de varredura ao mesmo método:

    1. Abra o outro arquivo de dados.
    2. Associe a outra injeção ao mesmo método.
    3. Selecione seu método original. Em seguida, clique com o botão direito na nova injeção e selecione Adicionar/Atualizar compostos MS.

    Os novos compostos serão adicionados ao método selecionado.

15. Volte a processar os dados.

    Durante o reprocessamento, será extraído automaticamente um EIC para cada valor m/z (de ambos os tipos de íons, alvo e qualificador), que será listado na árvore de injeção.

    A resposta de íons qualificadores é comparada com a resposta do íon-alvo. Se estiver dentro de uma janela de resposta definida, o qualificador será listado como Aprovado em Resultados da Injeção.

    Os EICs dos íons-alvo são usados para quantificação.